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KRAS G12D/BaF3

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I. Background

      KRAS 基因是 RAS 基因家族成员之一。在 RAS 基因家族中,还有 NRAS 和 HRAS。 KRAS 是一种小鸟苷三磷酸酶,通过将膜生长因子受体与细胞内信号通路和转录因子偶联, 在细胞增殖、分化、存活和代谢等生物过程中充当开关。

      KRAS 突变通常发生在 KRAS 基因的氨基酸残基 12、13 或 61 处,残基 12 (G12C、 G12D、G12R、G12A、G12S 和 G12V ) 是最常见的突变位点。KRAS[G12C]是非小细胞 肺癌(NSCLC)中最常发生的基因突变之一,它激活了 RAS/MAPK 信号通路并维持增殖 信号的转导,从而促进肿瘤细胞的生长和扩散。KRAS 是癌症中最常见的基因突变之一, 约 90%的胰腺癌肿瘤中都能检测到 KRAS 突变,接受化疗的胰腺癌患者的诊断后生存期通 常只有 6~12 个月,且只有不到 40%的胰腺癌患者会对 KRAS 抑制剂治疗产生反应。

      免疫治疗是 NSCLC 的一种新兴疗法,可通过激活患者的免疫系统抑制肿瘤生长。有 研究表明,激活 KRAS 信号通路可上调 PD-L1 表达。KRAS 突变的肿瘤往往含有较高的肿 瘤突变负荷和较多的肿瘤浸润淋巴细胞,表明 KRAS 突变通常与炎症性肿瘤微环境和肿瘤 免疫原性相关,为免疫疗法提供了理论依据。

 
II. Description

      BaF3(小鼠原 B 细胞)的生长和增殖需要 IL-3 的维持。通过引入各种表达激酶的基因, 能作为 BaF3 的驱动基因,让 BaF3 不再依赖 IL-3 而增殖,进而激酶基因成为 BaF3 增殖依赖的驱动基因,用于评估小分子药物对激酶的靶向抑制作用,原理及流程见下图所示。
 



Figure 1. 
KRAS[G12D] BaF3 细胞的构建原理图

 
III. Introduction

Cell Line Name:

KRAS G12D/BaF3

Host Cell:

Ba/F3

Stability: 16 passages (in-house test, that not means the cell line will be instable beyond the passages we tested.)

Application:

Useful for the study of enzyme kinetics, screening inhibitors, and selectivity profiling.

Freeze Medium: 90% FBS+10% DMSO

Complete Culture Medium:

RPMI-1640+10%FBS+1 μg/ml puromycin

Mycoplasma Status:

Negative

 
IV. Representative Data

1.WB of KRAS G12D/BaF3

Figure 2. WB of KRAS G12D/BaF3

2.Sanger of KRAS G12D/BaF3

Figure 3. Sanger of KRAS G12D/BaF3

3. Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of KRAS [G12D] BaF3(C6).

 

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